代谢组学前处理基本流程(冷冻离心浓缩法)
代谢组学前处理基本流程（冷冻离心浓缩法）
一、样本预处理：
1.分装：将大体积收集的样本分成适量小体积样本，方便保存及使用，避免反复取样或冻溶操作。
2.冻干：将样品的中水份去除，或者浓缩大体积的样品，如植物类样品。
3.研磨或匀浆：将样本制备成细小粉末，破碎细胞或组织、释放出代谢物。
二、代谢物提取：
1.提取目的：
☆从样品中有效提取代谢物 (较高回收率)
☆去除干扰物(如盐和蛋白质)
☆浓缩低丰度或痕量代谢物
☆提取液与分析平台适用
2.常用方法：
☆蛋白质沉淀
☆液液萃取
☆固相萃取
☆衍生化
三、浓缩复溶：
1.浓缩 ：4℃条件下浓缩溶剂去除，达到置换溶剂或方便保存的目的。
冷冻离心浓缩仪CV600
2.复溶：选择合适溶剂溶解浓缩干燥的样品， 达到合适的分析浓度及溶剂体系。
代谢组学代谢物提取常用方法
方法类型 | 适用范围 | 常用溶剂 |
蛋白质沉淀法 | 从各水相中去除大分子蛋白质 | 1、与水互溶的有机溶剂；2、酸类(如甲酸);3、金属离子或盐；甲醇、乙醇、乙腈、丙酮等。 |
液液萃取 | 一般用于疏水性物质提取 | 1、与水不互溶的有机溶剂； 2、酸类(如甲酸);正已烷；氯仿；二氯甲烷；甲基叔丁基醚；乙醚；正庚烷；乙酸乙酯；正丁醇；氯代正丁烷等。 |
固相萃取 | 浓度低或受基质干扰大的物质纯化 | 甲醇、正己烷、甲酸甲酯等 |
衍生化 | 部分电离差信号响应低、在色谱保留差、化学性质不稳定(LC-MS);沸点高、挥发性低、热稳定性差、极性强的化合物(GC-MS) |
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